20 de juliol 2013

COMPTATGE DE NOSEMA

Share

Equip necessari: Microscopi 400X, càmera de comptatge, morter, aigua destil·lada, mesurador 1-15 ml, pipetes de transferència i pinces

Recol · lecció i preparació de les mostres per a les proves de Nosema
 
El primer pas consisteix a recollir una mostra de 30 a 60 abelles de la colònia. Les abelles s'obtenen de l'entrada, així que aconseguirem abelles de les més velles. La captura es pots fer a partir de crear el buit amb un petit aspirador.

Les abelles poden ser analitzades fresques, congelades (-18 ºC) o emmagatzemats en alcohol per provar més endavant.

Traieu l'abdomen (o budells) de les abelles i poseu-les en un morter. Tritureu tot el contingut. Afegiu 0,5 ml d'aigua per cada abella i ho barregeu amb el mà de morter.

Poseu una gota de la mostra a la ranura triangular de la cambra de comptatge. Cal assegurar-se que s'ompli completament, tot deixant reposar-la durant un minut per permetre que les espores s'assentin.

Per assegurar la precisió, ompliu a banda i banda de la càmera. Primer un costat de la càmera i buidem la pipeta, i torneu a omplir la pipeta per carregar el segon costat.


Espores de Nosema són ovals de forma regular amb un contorn fosc.


Compteu el nombre d'espores en cinc caselles.Multipliqueu el nombre d'espores en les 5 caselles per 25.000 per obtenir la càrrega d'espores per a la seva mostra. Per exemple, 100 espores totals en cinc quadrants x 25.000 = 2,5 milions d'espores per abella.

Font: Universitat de Minnesota